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主题:【原创】从台湾诈保案聊起——DNA鉴定的前世今生 -- 游识猷

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家园 两种做法都可以,看各人喜好和具体实验要求

EtBr加在胶里或者事后染色,除了方便的考虑,选择这两种方法,还要考虑这个问题:EtBr带正电,DNA的移动速率会受插入量的影响,EtBr插得越多DNA跑得越慢。这对某些用途来说不是很理想。

此外因为EtBr带正电,它的前界面会相对DNA做相向运动(在1%琼脂糖里的移动速率大概相当于几百bp的DNA片断),所以还没等DNA跑到头,小一些的DNA片段就已经跑出EtBr的前界面了,在低EtBr浓度的氛围里,DNA里插的EtBr会慢慢掉下来,荧光检测信号就低了。这对检测DNA的灵敏度和定量影响比较大。

所以把EtBr放在胶里,并不是很理想的做法。但是这样做比较方便,所以很流行。

事后放在EtBr里泡,从定量和测分子量的角度看,是最理想的。缺点是EtBr是在液体里,而且相对浓度要高一些,污染的可能性要大一些。此外多花5分钟泡胶也有点麻烦。一般情况下没必要给自己找这些麻烦。

另外,琼脂糖是琼脂除去了[带硫酸基团成分(这个词组比较长)]——琼脂胶的产物,它是不带电荷的,所以用来搞电泳很合适,不过要比琼脂贵许多(纯度比较高的就更加贵)。琼脂在中性pH附近带负电荷,而在带电基质里的电泳不很理想,受电渗的干扰比较大,因此琼脂做电泳基质是不很理想的。假如要跑带正电的东西还得考虑电荷相互作用的问题。

琼脂是直接从海藻里提取的,用在食品工业上的纯度也不算很高,所以很便宜,可以按公斤加。


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